培养基:应科研或生产的需要,由人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质(混合养料)。
任何培养基都应该具备微生物所需要六大营养要素碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水且比例适当。
培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础。
微生物培养基的用途:
1促进微生物生长繁殖;
②积累代谢产物;
3分离微生物菌种;
4鉴定微生物种类;
⑤微生物细胞计数;
⑥菌种保藏;
7制备微生物制品
原则
培养基组分应适合微生物的营养特点(目的明确)营养物的浓度与比例应恰当(营养协调)
物理化学条件适宜(条件适宜)
根据培养目的来选择不同来源的原料(经济节约)
根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。
培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为:
S 10g MgSO.7H2O 0.5g NHa)zSO。0.4g FeSO。0.01gH.PO。4g CaCl,0.25g H,O 1000ml
培养化能异养的大肠杆菌一种培养基是由下列化学成分组成:葡萄糖 5g NH4H2PO41g NaCl 5g MgSO4.7H2O 0.2gK2HPO41g H2O 1000ml
常见的培养四大类微生物的培养基
细菌(牛肉膏蛋白陈培养基):
牛肉膏 3g 蛋白陈 10g NaCl 5g H2O 1000ml
放线菌(高氏1号)
淀粉 20g K2HPO4 0.5g NaCI 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g KNO31g FeSO4 0.01g H2O 1000ml
酵母菌(麦芽汁培养基)
干麦芽粉加四倍水,在50°C--60°℃保温糖化3-4小时,用碘液试验检查至糖化完全为止,调整糖液浓度为10。煮沸后,沙布过滤,调PH为6.0。
霉菌(查氏合成培养基)
NaNO3 3q K2HPO41g KCI 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gFeSO4
0.01g 蔗糖 30g H2O 1000ml
营养物的浓度与比例应恰当
浓度过高——微生物的生长受到抑制;
浓度过小——不能满足微生物生长的需要;
碳氮比(C/N)直接影响微生物生长与繁殖及代谢产物的形成与积累,故常作为考察培养基组成时的一个重要指标
碳源中所含碳原子的 例:谷氨酸生产中
C/N比值=mol数
氮源中所含氮原子的mol C/N =4/1时,菌体大量
繁殖,谷氨酸积累少;
注:C/N 比有时也指培养基中还原 C/N=3/1 时,菌体生长糖与粗蛋白两种成分含量之比) 受抑制,而谷氨酸大量增加
a、pH
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。
通常培养条件:
细菌 pH7.0~8.0 放线菌:pH7.5~8.5
酵母菌pH3.8~6.0 霉菌:pH4.0~5.8 范围内生长
为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基中加入pH缓冲剂,或在进行工业发酵时补加酸、碱。
b.水活度
在天然环境中,微生物可实际利用的自由水或游离水的含量。
一般用在一定的温度和压力条件下,溶液的蒸汽压力与同样条件下纯水蒸汽压力之比表示,即:
aw=Pw/Pow(式中Pw代表溶液蒸汽压力,POw代表纯水蒸汽压力。)
tk ar w战小
微生物一般在aw为0.60~0.99的条件下生长;
aw过低时,微生物生长的迟缓期延长,生长速率和总生长量减少;微生物不同,其生长的最适αw不同。
c.氧化还原电位
氧化还原电位又称氧化还原电势(redox potential),是度量某氧化还原系统中的还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的一种指标,其单位是V(伏)或mV(毫伏)。
不同类型微生物生长对氧化还原电位的要求不同;
好氧性微生物:+0.1伏以上时可正常生长,以+0.3~+0.4伏为宜;